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高效RIPA裂解液采用优质原料配制，对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用，是经典常用的细胞组织快速裂解液。高效RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品主要用于常规的Western、IP等下游实验。

• 使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
  
• 提取过程简单方便，将蛋白提取的时间缩短至30分钟～1小时。
  
• 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
  
• 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
  
• 总蛋白提取液含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。
  
• 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

• 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2～8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
  
• 蛋白酶抑制剂从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
  
• 试剂拆封后请尽快使用完！

• 仪器准备：离心机、振荡器、涡旋混匀器、移液器、冰箱、冰盒、匀浆机/匀浆器
  
• 试剂准备：1×PBS缓冲液(pH7.4)、蛋白定量试剂盒
  
• 耗材准备：离心管、吸头、一次性手套

• 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
  
• 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
  
• 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
  
• 如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
  
• 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
  
• 下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。

• 细胞裂解
  
  • 裂解液制备：
    每1mL冷的RIPA裂解液中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
    
  • 取5～10×10⁶个细胞，在4℃，1000g条件下离心5～10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
    
  • 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
    
  • 每5×10⁶个细胞中加入500μL冷的裂解液，混匀后，在4℃条件下振荡15～20分钟。
    
  • 在4℃，12000～14000g条件下离心15分钟。
    
  • 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，用于下游实验。
• 组织裂解
  
  • 裂解液制备：
    每1mL冷的RIPA裂解液加入2μL蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
    
  • 取100mg组织样本用手术剪刀剪碎，加入1mL裂解液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。
    
  • 将组织匀浆液在4℃振荡15～25分钟。
    
  • 在4℃，12000～14000g条件下离心15分钟。
    
  • 将上清吸入另一预冷的干净离心管，用于下游实验。
    上述蛋白提取物可分装后于-80℃冰箱保存备用。

• 细胞裂解速度慢？
  为了充分保证提取得到的蛋白的活性，提取液采用独特的保护蛋白的配方，裂解能力温和，下游应用范围广。适当延长裂解的时间即可。
  
• 蛋白浓度低？
  处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
  
• 用什么方法定量蛋白？
  建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组分，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。